很难追踪非编码RNA的调控。现在,来自慕尼黑亥姆霍兹和慕尼黑工业大学(TUM)的研究人员报告说,他们已经开发出一种微创报告系统,可以监测编码和非编码RNA的RNA产生。
他们的发现发表在《自然细胞生物学》杂志上的一篇题为“内含子编码的顺反子转录本用于编码和非编码RNA的微创监测”的文章中。
研究人员写道:“尽管它们在评估(病理)生理细胞状态中起着重要作用,但传统的基因报告基因可以跟踪基因表达,但会在蛋白质上留下疤痕或显着改变成熟的信使RNA。”“如果不修改核苷酸序列,非编码RNA的多时间点测量目前是不可能的,这会改变它们的天然功能、半衰期和定位。因此,我们开发了内含子编码的无疤痕可编程核外顺反子转录物(INSPECT)作为嵌入感兴趣基因内含子的微创转录报告基因。”
“与以前的方法不同,INSPECT为修饰的内含子中的报告蛋白编码序列。这些是早熟RNA分子中的序列,在加工过程中被自然去除并被细胞消除。INSPECT稳定了内含子,这样它们在去除后不会被降解,而是被运送到细胞质中,在那里它们被翻译成报告蛋白,”第一作者Dong-JiunnJefferyTruong博士解释说,他是亥姆霍兹慕尼黑的小组组长。然后,研究人员可以使用常规方法检测荧光等报告蛋白信号。
新的分子生物学工具不仅解决了跟踪非编码RNA生成的问题,而且为研究编码RNA提供了优势。当前的报告系统经常冒着损坏正在研究的RNA或蛋白质的风险。INSPECT不是修改完整的RNA或蛋白质,而是修改内含子。
“INSPECT为生物医学工具箱增加了一个重要的分子生物学工具。它使研究某些非编码RNA分子在细胞发育中的作用以及探索如何调节它们的调节变得更加容易,例如,以防止它们变成癌细胞,”神经生物学工程教授GilWestmeyer博士说,嗯。“结合我们之前开发的用于研究蛋白质同种型的微创报告系统EXSISERS,未来有可能研究从RNA加工到活细胞中特定蛋白质变体产生的整个遗传调控过程。”